Wieso wird für den Nachweis von p-Nitrophenol den Proben NaOH zugegeben? -> Antwort Die Zugabe von NaOH verschiebt den pH-Wert vom Sauren ins Basische. Dadurch liegt das in der Reaktion freigesetzte Produkt p-Nitrophenol als p-Nitrophenolat-Anion vor, welches gelb ist. p-Nitrophenol, welches bei einem tiefen pH vorliegen würde, ist farblos. Im weiteren wird durch den hohen pH-Wert überschüssiges, nicht reagiertes Substrat (p-Nitrophenyl-[3H]acetat) hydrolysiert, wobei auch wieder p-Nitrophenolat entsteht. Wie würde sich das Elutionsprofil verändern, wenn die Reaktion bei pH 9 durchgeführt würde? -> Antwort Unter diesen Bedingungen würde die ganze Reaktion vollständig ablaufen; das gebildete Acylenzym würde sofort hydrolysiert. Deshalb würde das Substrat vollständig in p-Nitrophenol und [3H]Acetat gespalten. Die proteinhaltigen Fraktionen würden keine Radioaktivität aufweisen.